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U251MG/TMZ+luc人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞
更新時間:2024-08-02 點擊量:299

U251MG/TMZ+luc人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞

Human astroglioma resistant temozolomide cells ,U251 MG/TMZ+luc

貨號:YJ-h244(STR(U251MG鑒定))

價格: 3200.0

規格: 1*10 6

細胞介紹

該細胞由U251MG/TMZ細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1)來源:U251MG/TMZ

2)形態:上皮細胞樣,貼壁生長

3)含量:>1*10 6細胞數

4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。


細胞運輸、保存及注意事項


復蘇細胞

凍存細胞

包裝

充液的T25細胞培養瓶

1mL凍存管

運輸條件

常溫

干冰

保存方式

75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細胞培養箱

-80℃冰箱中保存過夜后轉入液氮/立即復蘇

注意事項

1. 收到細胞后,若發現培養瓶破損、漏液及細胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請立即拍照并聯系我們。照片包括細胞培養瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細胞照片(100倍,200倍各2張);

2. 若收到的復蘇細胞有少量細胞脫落、飄起,可能由于運輸途中導致。請先于37℃恒溫細胞培養箱中靜置2~3h后,再進行處理;

3. 復蘇細胞的充液培養基為不含藥物的維持培養基,血清濃度較低,收到細胞后請及時更換為完全培養基;

4. 建議收到細胞后,首先進行擴增(至少3代),并凍存部分細胞以備用。

5. 細胞傳代或凍存過程中,不可使用含有藥物的培養基。

細胞培養試劑的配制

1TMZ藥物的配制及保存

建議將TMZ藥物配制成16mg/mL的母液:即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ藥物,使其完全溶解。(若所購買的TMZ藥物規格為10mg,則加入625uL DMSO溶液,待其完全溶解即為16mg/mL母液)

注意:可根據用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的TMZ4℃保存1周,-20℃保存1個月,-80℃保存6個月。

2)凍存液的配制

90%優質胎牛血清+10%DMSO,現用現配。

3)完全培養基的配制(推薦使用YJ-h244-001b

成分

體積/濃度

優質胎牛血清

10%

雙抗

1%

16ug/mL TMZ

0.1%母液(16mg/mL

DMEM培養基

補充至所需體積

細胞培養條件

氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37℃,培養箱濕度為70%~80%。

細胞處理

1)凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養基重懸細胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養基的培養瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細胞培養箱中過夜培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況,2~3day換液。

注意:細胞復蘇過程中,不可使用含有藥物的培養基。須在細胞完全貼壁,形態完全展開,生長狀態穩定后,方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態較為緩慢,可適當降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養基培養至細胞生長狀態較好時,再更換為所需的TMZ濃度;

建議復蘇細胞時始終穿戴防護手套和面罩,避免凍存管因溫差較大而發生爆炸,造成人員傷害。

2)細胞傳代(建議以同等底面積的培養瓶/皿按照12比例傳代)

待細胞密度達到80%~90%時,即可進行傳代培養。

棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次,吸凈殘余的PBS。

加入適當體積的0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25-1mL,其它培養器皿可覆蓋培養底面即可),置于37℃培養箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養瓶使細胞全部脫落。迅速拿回操作臺,加入2倍體積的、含10%FBS的培養基中止消化。

將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心5min,棄去上清液。

向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養基重懸細胞,輕吹混勻。將細胞懸液按11的比例均勻鋪于2個新的培養瓶/皿中,添加6~8mL完全培養基,置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況,2~3day換液。

注意:細胞傳代過程中,不可使用含有藥物的培養基。須在細胞完全貼壁,形態完全展開,生長狀態穩定后,方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態較為緩慢,可適當降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養基培養至細胞生長狀態較好時,再更換為所需的TMZ濃度。

3)細胞凍存

細胞凍存時,步驟同2)細胞傳代的①~④,細胞計數后,加入配制好的細胞凍存液,重懸細胞,按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

細胞篩選

穩定轉染luc的細胞,隨細胞傳代次數的增加,其luc熒光強度逐漸減弱。若要維持熒光強度,需加入嘌呤霉素進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/mL嘌呤霉素的完全培養基維持培養,若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/mL嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/mL。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養基培養,至細胞密度約80%,可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/mL嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養基正常培養。

U251MG/TMZ+luc人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞

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