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U266人骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)說明書
更新時(shí)間:2020-04-30 點(diǎn)擊量:2211

細(xì)胞信息表

 

細(xì)胞名稱         U266人骨髓瘤細(xì)胞

種屬            人

組織來源          外周血

生長狀態(tài)          懸浮細(xì)胞

培養(yǎng)條件          培養(yǎng)基類型:RPMI1640培養(yǎng)基

                                                FBS:10%

              抗生素:雙抗

              培養(yǎng)條件:37℃,CO2:5%

 

傳代方法 :

收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài):

如果沒長滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已經(jīng)長滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

 

貼壁細(xì)胞傳代方法:

  1棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

  2加1ml0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化,待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

 

懸浮細(xì)胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

  1直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

  2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

一般沒有特殊說明,細(xì)胞一般是一傳二。

 

凍存方法:

70%*培養(yǎng)基,20%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲(chǔ)存:液氮中長期保存。

注  1觀察細(xì)胞建議在低倍鏡下觀察,便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。

2在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等,請(qǐng)?jiān)谝恢軆?nèi)與我們聯(lián)系。

 

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