欧美日韩一区二区高清视-欧美日韩一区在线观看-欧美日韩一日韩一线不卡-欧美日韩一卡-亚洲免费色图-亚洲免费网站

網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒說明書
產(chǎn)品目錄
過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒說明書
更新時間:2020-02-26 點(diǎn)擊量:2636

過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒說明書

紫外分光光度法

測定意義:                           

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用

測定原理:

H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能夠分解H2O2,使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降,根據(jù)吸光度的變化率可計算出CAT活性。

自備的儀器和用品

紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰蒸餾水

試劑組成和配制

提取液:60mL×1瓶,4℃保存

試劑一:60mL×1瓶,4℃保存

試劑二:100uL×3瓶,4℃保存。

粗酶液提取

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g:提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至240nm處,蒸餾水調(diào)零。

2、CAT檢測工作液的配制:用時在每瓶試劑二(100 uL)中加入20mL試劑一,充分混勻,作為工作液;用不完的試劑4℃保存一周;

3、測定前將CAT檢測工作液37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min

4、取1mLCAT檢測工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL樣本,混勻室溫下立即測定240nm下的初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,計算ΔA=A1-A2

CAT活性計算:

1、血清(漿)CAT活力的計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(U/mL)= [ΔA×V反總÷ε×d)×109]÷V樣÷T=678×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(U/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d)×109(W× V樣÷V樣總)÷T=678×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T =1.356×ΔA

 

V反總:反應(yīng)體系總體積,1.035×10-3 L;ε:H2O2摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.035 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1 minW:樣質(zhì)量,gCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。

WB實(shí)驗(yàn)代做報價

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

主站蜘蛛池模板: 国产激爽大片在线播放 | 国产一区二区在免费观看 | 国产小片 | 欧美极品第1页专区 | 孕妇一级片 | 加勒比色久综合在线 | japanesetubesexfree | 国产精品福利午夜h视频 | 亚洲久久在线观看 | 免费一级成人毛片 | 一级一级毛片看看 | 欧美二级在线观看免费 | 久久经典免费视频 | 久久国产成人精品国产成人亚洲 | 亚洲欧美另类自拍 | 丝袜足液精子免费视频 | 特级毛片8级毛片免费观看 特级毛片免费观看视频 | 一色屋精品亚洲香蕉网站 | 老司机免费福利午夜入口ae58 | a级成人高清毛片 | 国产精品日韩欧美在线 | 精品国产免费第一区二区 | 国产精品秒播无毒不卡 | 国产精品亚洲午夜不卡 | 亚洲国产精品大秀在线播放 | 中文字幕在线不卡 | 丁香五香天堂 | 成年毛片| 日韩在线视频观看 | 亚洲国产欧美国产综合一区 | 国产成人教育视频在线观看 | 亚洲 成人 欧美 自拍 | 国产亚洲小视频 | 日本三级香港三级人妇r | 国产亚洲亚洲精品777 | 久久视频免费在线观看 | 国产一级一级一级国产片 | 日韩中文字幕在线视频 | 一区二区三区免费视频观看 | 亚洲欧美卡通成人制服动漫 | 国产精品久久久久久麻豆一区 |